Produktai

Branduolinio baltymo Lamin-A mutantinės formos, vadinamos Progerin (PG) arba Lamin AΔ50, branduolinis kaupimasis atsiranda sergant Hutchinson-Gilford Progeria sindromu (HGPS) arba Progeria, pagreitėjusio senėjimo liga.Vienas iš pagrindinių šio genetinio sutrikimo simptomų yra poodinių riebalų netekimas dėl dramatiškos lipodistrofijos. Mes stabiliai sukėlėme žmogaus PG ir GFP – žalio fluorescencinio baltymo – kaip kontrolę, ekspresiją 3T3L1 ląstelėse, naudodamiesi lentivirusine sistema tirdami PG ekspresijos poveikis šios ląstelių linijos, vieno iš dažniausiai naudojamų adipogeninių modelių, diferenciacijos gebėjimui.Siekiant ištirti PG kaupimosi poveikį, buvo atlikta kiekybinė proteomika (iTRAQ).Kai kurie moduliuoti baltymai buvo patvirtinti imunoblotingu ir realaus laiko PGR.Mitochondrijų funkcija buvo analizuojama išmatuojant a) mitochondrijų bazinį aktyvumą, b) superoksido anijonų gamybą ir c) individualų skirtingo kvėpavimo grandinės komplekso efektyvumą. Mes nustatėme, kad per didelė PG ekspresija per lentiviruso geną sukelia proliferacijos greičio sumažėjimas ir adipogeninio pajėgumo defektai, palyginti su kontrole.Kiekybinė proteomikos analizė parodė, kad PG ekspresuojančiuose preadipocituose reikšmingai (p<0,05) moduliuojamas 181 baltymas.PG ekspresuojančiose ląstelėse sutrinka mitochondrijų funkcija.Konkrečiai, mes nustatėme komplekso I aktyvumo padidėjimą ir superoksido anijono perprodukciją.Inkubavimas su reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS) šalinančiomis medžiagomis skatina autofaginės proteolizės sumažėjimą, kaip rodo LC3-II/LC3-I santykis. PG ekspresija 3T3L1 ląstelėse skatina pokyčius keliuose biologiniuose procesuose, įskaitant citoskeleto struktūrą, lipidų apykaitą, kalcį. mitochondrijų reguliavimas, vertimas, baltymų lankstymas ir energijos gamyba.Mūsų duomenys sustiprina ROS kaupimosi indėlį į priešlaikinio senėjimo fenotipą ir nustato ryšį tarp mitochondrijų disfunkcijos ir proteostazės praradimo HGPS.