Produktai

Panašiai kaip ir kitus teigiamos grandinės RNR virusus, tombusvirusus replikuoja su membrana susietas viruso replikazės kompleksas (VRC).VRC susideda iš p92 viruso koduojamos nuo RNR priklausomos RNR polimerazės (RdRp), viruso p33 RNR chaperono ir kelių kartu pasirinktų šeimininko baltymų.Kad po vertimo jis taptų funkciniu RdRp, p92 replikacijos baltymas turėtų būti įtrauktas į VRC, o po to suaktyvinamas.Anksčiau neląsteliniame mielių ekstrakto tyrime parodėme, kad pomidorų krūminio kaskadininkų viruso (TBSV) RdRp aktyvacija reikalauja tirpaus (-ių) šeimininko faktoriaus (-ių).Šiame straipsnyje mes nustatome ląstelių šilumos šoko baltymą 70 (Hsp70) kaip pasirinktą šeimininko faktorių, reikalingą N-galu sutrumpinto rekombinantinio TBSV RdRp aktyvavimui.Be to, Hsp70 funkcijos blokavimas mažų molekulių pagrindu slopina RNR sintezę, kurią sukelia tombusviruso RdRp in vitro.Be to, parodome, kad neutralūs fosfolipidai, būtent fosfatidiletanolaminas (PE) ir fosfatidilcholinas (PC ), sustiprina RdRp aktyvaciją in vitro .Priešingai, fosfatidilglicerolis (PG) turi stiprų ir dominuojantį slopinamąjį poveikį RdRp aktyvacijai in vitro.Taip pat parodome, kad PE ir PC stimuliuoja RdRp ir viruso pliusinės grandinės RNR [(+)RNR] sąveiką, o PG slopina virusinės RNR prisijungimą prie RdRp.Remdamiesi įvairių fosfolipidų stimuliuojančiu ir slopinamuoju vaidmeniu tombusviruso RdRp aktyvavime, siūlome, kad tombusvirusai galėtų panaudoti tikslinių tarpląstelinių membranų lipidų sudėtį, kad reguliuotų naują VRC surinkimą infekcijos metu. Viruso koduota RNR priklausoma RNR polimerazė (RdRp), kuris yra atsakingas už virusinės RNR palikuonių sintezę kelių teigiamos grandinės RNR virusų užkrėstose ląstelėse, iš pradžių yra neaktyvus.Tikėtina, kad ši strategija padės išvengti virusinės RNR sintezės citozolyje, kuri greitai sukeltų RNR sukeltų ląstelių antivirusinių atsakų indukciją.Surenkant su membrana susietą replikazės kompleksą, virusinis RdRp aktyvuojamas per nevisiškai suprantamą procesą, dėl kurio RdRp gali sintezuoti RNR.Naudodami TBSV RdRp, parodome, kad kartu pasirinktas ląstelinis Hsp70 chaperonas ir neutralūs fosfolipidai palengvina RdRp aktyvaciją in vitro .Priešingai, fosfatidilglicerolis (PG) turi dominuojantį slopinamąjį poveikį in vitro RdRp aktyvacijai ir RdRp-virusinės RNR sąveikai, o tai rodo, kad membraninis mikrodomenas, supantis RdRp, labai veikia jo gebėjimą RNR sintezei.Taigi, viruso RdRp aktyvacija greičiausiai priklauso nuo kelių šeimininko komponentų užkrėstose ląstelėse.