Produktai

Viso proteomo fosforilinimo įvykių analizė vis dar yra pagrindinis analitinis iššūkis dėl didžiulio baltymų fosforilinimo tinklų sudėtingumo.Šiame darbe vertiname Lys-N, Lys-C ir tripsino papildomumą, atsižvelgiant į jų gebėjimą prisidėti prie pasaulinės fosfoproteomo analizės.Patobulinta žemo pH stiprio katijonų mainų versija buvo naudojama efektyviai atskirti N-galu acetilintus, fosforilintus ir nemodifikuotus peptidus.Naudojant trijų fermentų derinį, iš viso buvo galima identifikuoti 5036 neperteklinius fosfopeptidus, kurių klaidingų atradimų dažnis yra <1% iš 1 mg baltymo.Mūsų duomenys atskleidė, kad su skirtingomis proteazėmis sugeneruotų fosfopeptidų duomenų rinkinių sutapimas buvo nežymus, tuo tarpu dviejų panašiai generuotų triptinių duomenų rinkinių sutapimas buvo bent 4 kartus didesnis.Tokiu būdu lygiagretus Lys-N ir tripsino naudojimas leido 72% padidinti aptiktų fosfopeptidų skaičių, palyginti su d su vien tripsinu, o tripsino kartojimo eksperimentas padidino tik 25%.Taigi, sutelkdami dėmesį tik į tripsino ir Lys-N duomenis, nustatėme 4671 nereikalingą fosfopeptidą.Tolesnė aptiktų vietų analizė parodė, kad Lys-N ir tripsino duomenų rinkiniai buvo praturtinti žymiai skirtingais fosforilinimo motyvais, o tai dar labiau įrodo, kad daugiaproteazės metodai yra labai vertingi fosfoproteomų analizėse.