Produktai

Fluoresceino ir fluoresceino metilo esterio monogalaktopiranozidai: sintezė, fermentinė hidrolizė naudojant biotnilintą β-galaktozidazę ir transliacijos difuzijos koeficiento nustatymas

Fluoresceino monoglikozidai (d-galaktopiranozidas (FMG) ir d-gliukopiranozidas) ir jų metilo esteris (MFMG) buvo pagaminti iš acetobromogliukozės/galaktozės ir fluoresceino metilo esterio.Atlikti galakto darinių fermentinės hidrolizės eksperimentai (naudojant biotiniluotą β-galaktozidazę) ir apskaičiuoti kinetikos parametrai.Hidrolizės metu pastebėtas 15–20 kartų padidėjęs fluorescencijos intensyvumas.Pastebėtas tiesinis fluorescencijos padidėjimas trumpą laiką ir mažą substrato koncentraciją, todėl šie junginiai yra naudingi ir jautrūs galaktozidazės zondai.MFMG Michaelis-Menten konstantos (Km) vertės dydis yra didesnis nei FMG, o tai rodo galimą fluorogeninio substrato konformacinį pokytį.Km vertė biotinilinto β-Gal su FMG yra mažesnė nei natūralaus fermento.Šis stebėjimas rodo didesnį biotinilinto fermento substrato afinitetą, palyginti su natūraliu fermentu.Naudojant fluorescencinės koreliacijos spektroskopiją, buvo išmatuoti fluorogeninių substratų ir abiejų produktų transliacijos difuzijos koeficientai.Nustatyta, kad fluorogeninių substratų ir fermentinės hidrolizės produktų transliacijos difuzijos koeficientai yra panašūs – 3,5–4,5 × 10–10 m2 s–1.Taigi fermentinės kinetikos sustiprėjimas arba sulėtėjimas dėl substrato ir produkto transliacinio mobilumo skirtumo nėra toks akivaizdus.