Produktai

Kolicino E1 kanalo domeno membranos topologija buvo tiriama naudojant fluorescencinį rezonansinį energijos perdavimą (FRET).FRET donoras buvo genetiškai užkoduota fluorescencinė aminorūgštis (kumarinas), o FRET akceptorius - selektyviai pažymėta cisteino liekana, pririšta su DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimidu).Fluorescencinė kumarino liekana buvo įtraukta į baltymą per stačiakampę tRNR/aminoacil-tRNR sintetazės porą, kuri leido selektyviai įsiterpti į bet kurią kolicino kanalo domeno vietą.Kiekvienas variantas turėjo stop (TAG) mutaciją kumarino įtraukimui ir cisteino (TGT) mutaciją DABMI prijungimui.Šeši tarpspiraliniai atstumai 1–6 spiralėse buvo nustatyti naudojant FRET analizę tiek tirpioms, tiek membranoms surištoms būsenoms.FRET duomenys parodė didelius tarpsraigtinių atstumų tarp 3–6 spiralių pokyčius, kai susiejama su membrana, suteikiant naują supratimą apie kanalo domeno struktūrą, susietą su membrana.Apskritai, kumarino-DABMI FRET tarpspiralinis efektyvumas sumažėjo surišus membraną, remiantis kolicino kanalo skėtiniu modeliu.Remiantis dabartiniais ir anksčiau paskelbtais FRET duomenimis, buvo sukurtas preliminarus kanalo domeno uždaros būsenos modelis.Modelis siūlo apvalų 1–7 sraigtų išdėstymą pagal laikrodžio rodyklę nuo tarpląstelinės pusės ir 1, 6, 7 ir 10 sraigtų membranos sąsają aplink centrinį transmembraninį plaukų segtuką, kurį sudaro 8 ir 9 sraigtai.