Produktai

Daugiau nei 70% žemo laipsnio gliomų turi heterozigotinę R132H mutaciją geno, koduojančio izocitrato dehidrogenazę 1 (IDH1).Tai suteikia fermentui naują gebėjimą paversti α-ketoglutaratą į 2-hidroksiglutaratą, o tai galiausiai sukelia naviko atsiradimą.Pagrindinis 2-hidroksiglutarato gamybos šaltinis yra glutaminas, kuris sergant vėžiu taip pat yra trikarboksirūgšties ciklo (TCA) anaplerozės šaltinis.Alternatyvus anaplerozės šaltinis yra piruvato srautas per piruvato karboksilazę (PC), kuris yra įprastas normalių astrocitų kelias.Šio tyrimo tikslas buvo nustatyti, ar PC yra TCA anaplerozės šaltinis IDH1 mutantinėse ląstelėse, kuriose glutaminas naudojamas 2-hidroksiglutarato gamybai. Buvo tiriami įamžinti normalūs žmogaus astrocitai, sukurti taip, kad ekspresuotų heterozigotinį IDH1 arba laukinio tipo IDH1 mutantą.Piruvato srautas per PC ir per piruvato dehidrogenazę (PDH) buvo nustatytas naudojant magnetinio rezonanso spektroskopiją, siekiant nustatyti [2-¹3C]gliukozės kilmės ¹³C-žymėto ledo glutamato ir glutamino ženklinimą.Aktyvumo tyrimai, RT-PGR ir Western blot buvo naudojami atitinkamų fermentų ekspresijai ir aktyvumui nustatyti.Vėžio genomo atlaso (TCGA) duomenys buvo analizuojami, siekiant įvertinti fermentų ekspresiją žmogaus gliomos mėginiuose. Palyginti su laukinio tipo ląstelėmis, mutantinės IDH1 ląstelės žymiai padidino frakcijų srautą per PC.Tai buvo susijusi su reikšmingu kompiuterio aktyvumo ir ekspresijos padidėjimu.Tuo pačiu metu PDH aktyvumas reikšmingai sumažėjo, greičiausiai dėl žymiai padidėjusio PDH kinazės 3 slopinamojo PDH fosforilinimo. Remiantis stebėjimu ląstelėse, TCGA duomenų analizė parodė reikšmingą PC ekspresijos padidėjimą IDH ekspresuojančiuose žmogaus gliomos mėginiuose, palyginti su laukiniais. Mūsų išvados rodo, kad PC ir PDH pokyčiai gali būti svarbi ląstelių prisitaikymo prie IDH1 mutacijos dalis ir gali būti potencialūs gydymo tikslai.