Produktai

Graveso orbitopatijos (GO) progresavimo metu įrodyta, kad orbitiniai fibroblastai skiriasi į brandžius adipocitus ir vėliau kaupiasi riebalinis audinys.Autofagija dalyvauja adipogenezėje, tačiau mažai žinoma apie autofagijos vaidmenį inicijuojant ir progresuojant GO.Šio tyrimo tikslas – ištirti autofagijos vaidmenį GO patogenezėje. Buvo analizuojami GO sergančių ir sveikų asmenų orbitiniai riebalinio/jungiamojo audinio eksplantai, taip pat izoliuoti orbitiniai fibroblastai.Adipogenezė buvo sukelta naudojant diferencijuojančią terpę su vandenilio peroksidu arba be jo, o autofagija buvo manipuliuojama naudojant bafilomiciną A1 ir Atg5 nukreiptą trumpo plaukų segtuko RNR (shRNR).Autofagosomos buvo identifikuotos elektroniniu mikroskopu.Su autofagija susijusių genų ekspresija ir su adipogeneze susiję transkripcijos faktoriai buvo analizuojami naudojant realaus laiko atvirkštinės transkripcijos polimerazės grandininę reakciją ir (arba) Western blot analizę.Lipidų lašelių kaupimasis buvo tiriamas naudojant Oil Red O dažymą. GO ląstelėse autofaginių vakuolių buvo daugiau nei ne GO ląstelėse (p<0,05).Su autofagija susijusių genų ekspresija buvo žymiai didesnė GO audiniuose ir ląstelėse nei atitinkamai ne GO.Interleukinas-1β padidino LC3-II, p62 ir Atg7 baltymų kiekį GO ląstelėse.Autofagosomų kaupimasis buvo parodytas 4 adipogenezės dieną ir sumažėjo 10 dieną kartu su lipidų lašelių susidarymu.LC3 ir p62 baltymų ekspresija padidėjo per 48 valandas nuo diferenciacijos ir palaipsniui mažėjo nuo 4 iki 10 dienos. Bafilomicino A1 gydymas ir Atg5 numušimas shRNR slopino lipidų lašelių kaupimąsi ir adipogeninių žymenų ekspresiją. Autofagija padidėjo GO audiniuose ir ląstelėse, palyginti su ne GO audiniai ir ląstelės, o tai rodo, kad autofagija vaidina svarbų vaidmenį GO patogenezėje.Autofagijos manipuliavimas gali būti terapinis GO taikinys.