Produktai

Naujas didelio efektyvumo skysčių chromatografijos tyrimas glikoziltransferazėms, pagrįstas derivatizavimu antranilo rūgštimi ir fluorescencijos aptikimu.

Tyrimai buvo sukurti naudojant unikalią 2-aminobenzenkarboksirūgšties (2AA; antranilo rūgštis, AA) ženklinimo chemiją, skirtą β1-4 galaktoziltransferazės (GalT-1) ir α2-6 sialiltransferazės (ST-6) aktyvumui matuoti naudojant didelio efektyvumo skystį. chromatografija (HPLC) su fluorescenciniu aptikimu (Anumula KR. 2006. Fluorescencijos derivatizacijos metodų pažanga, skirta glikoproteinų angliavandenių aukštos kokybės skysčių chromatografinei analizei. Anal Biochem. 350:1-23).N-acetilgliukozaminas (GlcNAc) ir N-acetillaktozaminas buvo naudojami kaip akceptoriai, o uridino difosfatas (UDP) - galaktozė ir citidino monofosfatas (CMP) -N-acetilneuramino rūgštis (NANA) buvo atitinkamai GalT-1 ir ST-6 donorai.Fermentiniai produktai buvo pažymėti in situ AA ir buvo atskirti nuo substratų TSKgel Amide 80 kolonėlėje normalios fazės sąlygomis.Fermentų vienetai buvo nustatyti iš smailių plotų, lyginant su tuo pačiu metu gautais standartais Gal-β1-4GlcNAc ir NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Buvo nustatytas tyrimų tiesiškumas (laikas ir fermentų koncentracija), tikslumas (vidinis ir tarpinis tyrimas) ir atkuriamumas.Nustatyta, kad tyrimai buvo naudingi stebint fermentų aktyvumą išskyrimo ir gryninimo metu.Tyrimai buvo labai jautrūs ir buvo lygūs arba geresni už tradicinius radioaktyvaus cukraus matavimus.Tyrimo formatas taip pat gali būti naudojamas kitų transferazių aktyvumui matuoti, jei angliavandenių akceptoriuose yra redukcinis ženklinimo galas.Glikoproteinų akceptorių tyrimas buvo sukurtas naudojant IgG.Sukurtas trumpas HPLC profiliavimo metodas, skirtas IgG glikanams (dvi antenos G0, G1, G2, mono- ir disialilintas) atskyrimui, kuris palengvino greito GalT-1 ir ST-6 aktyvumo nustatymą.Be to, šis profiliavimo metodas turėtų būti naudingas stebint IgG glikanų pokyčius klinikinėje aplinkoje.