Produktai

Vienas iš veiksnių, trukdančių klinikiškai taikyti regeneracinę mediciną degeneracinėms kremzlių ligoms gydyti, yra tinkamas ląstelių šaltinis.Chondrocitai, vienintelis kremzlės ląstelių tipas, auginami in vitro kultūros sąlygomis, siekiant padidinti ląstelių skaičių, praranda savo fenotipą ir gebėjimą generuoti hialininį kremzlinį audinį.Šiame tyrime nustatėme, kad be serumo ir augimo faktoriaus trimatė (3D) kultūros sistema atkuria perėjusių chondrocitų gebėjimą formuoti kremzlės audinį in vitro, o tai apima sox9. Galvijų sąnarių chondrocitai buvo pasėti du kartus leidžia išplėsti ląstelių skaičių (P2) ir auginti dideliu tankiu ant 3D II tipo kolagenu dengtų membranų didelio gliukozės kiekio terpėje, papildytoje insulinu ir deksametazonu (SF3D).Ląstelės buvo apibūdintos po vieno sluoksnio išplėtimo ir po 3D kultūros, naudojant srauto citometriją, genų ekspresiją ir histologiją.Buvo apibūdinti ankstyvieji signalų perdavimo takų pokyčiai per diferenciaciją. P2 ląstelėse buvo 99% CD44(+) ir 40% CD105(+) antigeno profilis, panašus į pirmtakus, ir genų ekspresijos profilis, rodantis tarpzonines ląsteles.P2 SF3D išreiškė chondrogeninius genus ir sukauptą tarpląstelinę matricą.Sumažėjęs insulino receptorių (IR) reguliavimas naudojant HNMPA-(AM3) arba PI-3/AKT kinazės kelias (aktyvuojamas gydant insulinu) su Wortmannin slopina kolageno sintezę.HNMPA-(AM3) sumažino Col2, Col11 ir IR genų, taip pat Sox6 ir -9, ekspresiją.HNMPA-(AM3) apdorotų ląstelių bendro imunoprecipitacijos ir chromatino imunoprecipitacijos analizės parodė, kad koaktyvatoriai Sox6 ir Med12 jungiasi su Sox9, bet sumažino Sox9-Col2a1 surišimą. Aprašome naują kultivavimo metodą, kuris leidžia padidinti chondrocitų skaičių ir skatina į hialiną panašus kremzlės audinio susidarymas iš dalies dėl insulino sukelto Sox9-Col2a1 prisijungimo.Šiuo metodu sukurto audinio tinkamumas naudoti sąnarių taisymui turi būti ištirtas in vivo.