Produktai

Norėdami konkrečiai kiekybiškai įvertinti kelis 5-fluoruracilo (5-FU) ir dviejų endogeninių monofosfato nukleotidų metabolitus, sukūrėme originalų metodą, pagrįstą skysčių chromatografijos-tandemo masės spektrometrija (LC-MS/MS).Šis tyrimas leido nustatyti: i) 5-fluor-2'-deoksiuridin-5'-monofosfato (5-FdUMP) gamybą ląstelėse iš 5-FU arba 5-fluor-2'-deoksiuridino (5-FdUrd) ii) 5-FdUMP koncentracijos įtaką ląstelėje esančiam 2'-deoksiuridin-5'-monofosfato (dUMP) ir timidino-5'-monofosfato (TMP) santykiui ir iii) 5-FdUMP sekrecijos laipsniui ir 5-FU iš žmogaus kultivuotų ląstelių naudojant ABC transporterius.Mūsų eksperimentinėmis sąlygomis ląstelės buvo inkubuojamos su 5-FU arba 5-FUrd.Tada ląstelių baltymai buvo nusodinti metanoliu.Ši procedūra užtikrino didelį ekstrahavimo atgavimą.Be to, norėdami išmatuoti 5-FU ir 5-FdUMP sekreciją iš ląstelių, atlikome šių molekulių kiekybinį įvertinimą auginimo terpėje.Terpė buvo arba tiesiogiai įšvirkščiama (5-FU), arba po kietosios fazės ekstrahavimo naudojant Oasis Wax ekstrahavimo kasetę (5-FdUMP).Analitės buvo atskirtos dC18 Atlantis 3, 5 μm, (100 mm × 2, 1 mm id) kolonėlėje su izokratiniu režimu, naudojant amonio formiato buferį / metanolį / vandenį (5/5/90, v/v) kaip judriąją fazę.Bėgimo laikas neviršijo 6,2 min.Analitės buvo jonizuotos elektros purškimo sąsajoje neigiamų jonų režimu.Mes patvirtinome metodą 2,5–150 ng ml –1 diapazone pagal junginius.Skirtumas tarp tyrimų ir tarp tyrimų buvo mažesnis nei 10 % per septynias dienas.Visi junginiai buvo stabilūs ląstelėse arba auginimo terpėje, kai mėginiai buvo laikomi -20 ° C temperatūroje mažiausiai dvi savaites ir po trijų užšalimo-atšildymo ciklų.Abiejose terpėse matricos efekto nepastebėta.