Produktai

Patogeniniai molekuliniai keliai sergant cirozinėmis kepenų ligomis, tokiomis kaip hepatito C virusas (HCV), autoimuninis hepatitas (AIH) ir pirminė tulžies cirozė (PBC), yra menkai apibūdinti.Skirtingai išreikšti genai dažnai yra svarbūs ligos patogenezei.Supresijos subtraktyvioji hibridizacija (SSH) yra viso genomo metodas, praturtinantis skirtingai išreikštus mRNR nuorašus.Mes siekėme atlikti naujus diferencinės genų ekspresijos stebėjimus sergant ciroze, naudojant SSH kartu su kiekybine realaus laiko atvirkštinės transkriptazės polimerazės grandinine reakcija (RT-PCR).Kepenų transkriptai sergant HCV ciroze, AIH ciroze, PBC ir neliguotu kepenų audiniu buvo ištirti SSH.Gauti komplementarieji DNR (cDNR) klonai buvo pakartotinai tikrinami dėl diferencinės ekspresijos taškinio blotavimo hibridizacija ir tada sekvenuojami.Pasirinkta genų ekspresija buvo kiekybiškai įvertinta realaus laiko RT-PCR.Po SSH 694 klonai buvo pakartotinai patikrinti dėl diferencinės genų ekspresijos, iš kurių 145 buvo sekvenuoti ir nustatyta, kad jie kilę iš 89 skirtingų genų.Septyni klonai buvo homologiški tik su ekspresuotos sekos žymės (EST) sekomis, koduojančiomis genus, neturinčius žinomos funkcijos.Sureguliuota keturių genų ekspresija buvo patvirtinta realiuoju laiku RT-PGR: transmembraninis 4 superšeimos narys 3 (tetraspaninas CO-029) sergant visų formų ciroze, ežiuku sąveikaujantis baltymas (HIP) sergant AIH ciroze ir chitinazės 3 tipo-1 (HC gp-39 arba ykl-40) ir arginino-glutamo rūgšties kartojimas (RERE) sergant HCV ciroze.Visuose tirtuose audiniuose buvo pastebėti RERE geno polimorfizmai ir sujungimo variantai.Tetraspanino CO-029 reguliavimas pirmiausia buvo lokalizuotas tulžies latakų ląstelėse.Apibendrinant galima pasakyti, kad naudojant SSH kaip pagrindinį atradimo įrankį buvo atlikti nauji diferencinės genų ekspresijos stebėjimai sergant žmogaus ciroze.Visų pirma, būtina atlikti tolesnius RERE geno ir jo produktų tyrimus sergant su HCV susijusia kepenų liga.