Produktai

Būdas, kuriuo vienu metu vykstančių mutacijų poveikis keičiasi ir keičia fermentinį aktyvumą, nėra lengvai nuspėjamas, nes šis poveikis ne visada yra tiesinis.Taigi, vienu metu vykstančių aminorūgščių liekanų, kurios jungiasi su substratu, mutacijų poveikio apibūdinimas gali labai padėti suprasti fermentų substrato specifiškumą.Beta-glikozidazėje iš Spodoptera frugiperda (Sfbetagly) abu likučiai Q39 ir E451 sąveikauja su substratu ir tai būtina norint apibrėžti substrato specifiškumą.Dvigubi Sfbetagly mutantai (A451E39, S451E39 ir S451N39) buvo paruošti nukreiptos mutagenezės būdu, ekspresuojami bakterijose ir išgryninti naudojant afinitetinę chromatografiją.Šie fermentai buvo apibūdinti naudojant p-nitrofenilo beta-galaktozidą ir p-nitrofenilo beta-fukozidą kaip substratus.Sfbetagly pavienių ir dvigubų mutantų, turinčių į vietą nukreiptas mutacijas Q39 ir E451 padėtyse, k cat/Km santykis buvo naudojamas siekiant parodyti, kad dvigubų mutacijų (Gdouble) poveikis ESdouble Dagger (fermento pereinamojo būsenos komplekso) laisvai energijai. daggerxy) nėra pavienių mutacijų (Gdouble daggerx ir Gdouble daggery) atsiradusių padarinių suma.Šis Gdouble Dagger skirtumas rodo, kad pavienių mutacijų poveikis iš dalies sutampa.Taigi šis bendras efektas Gdouble Daggerxy įskaičiuojamas tik vieną kartą.Beta-glikozidazių kristalografiniai duomenys rodo, kad yra dvidantė vandenilio jungtis, apimanti Q39 ir E451 liekanas ir tą pačią substrato hidroksilo grupę.Todėl tiek termodinaminiai, tiek kristalografiniai duomenys rodo, kad likučiai Q39 ir E451 daro abipusę įtaką jų atitinkamoms sąveikoms su substratu.