Produktai

Baltymų fosforilinimas reguliuoja įvairias ląstelių funkcijas ir atlieka pagrindinį vaidmenį ankstyvame augalų vystyme.Norėdami papildyti ir išplėsti ankstesnius baltymų fosforilinimo Arabidopsis sodinukuose tyrimus, naudojome alternatyvų metodą, kuris derina baltymų ekstrahavimą nedenatūruojančiomis sąlygomis su imobilizuotos metalo jonų afininės chromatografijos (IMAC) praturtinimu nepažeistuose fosfoproteinuose Rubisco išeikvotuose ekstraktuose ir po to identifikavimas. naudojant dvimatę gelio elektroforezę (2-DE) ir skysčių chromatografijos tandeminę masių spektrometriją (LC-MS/MS).Virškinimas gelyje ir pasirinktų gelio dėmių analizė nustatė 144 fosforilintus peptidus ir liekanas, iš kurių tik 18 fosfopeptidų ir 8 fosfositai buvo rasti PhosPhAt 4.0 ir P3DB Arabidopsis thaliana fosforilinimo vietų duomenų bazėse.Daugiau nei pusė iš 82 nustatytų fosfoproteinų dalyvavo angliavandenių apykaitoje, fotosintezėje / kvėpavime arba oksidacinio streso reakcijos mechanizme.Atrodo, kad nepažeistų fosfoproteinų sodrinimas prieš 2-DE ir LC-MS / MS pagerina fosforilinto treonino ir tirozino likučių aptikimą, palyginti su metodais, kuriuose naudojamas sodrinimas peptidų lygiu, o tai rodo, kad šie du metodai šiek tiek papildo fosforilinimo vietos aprėptį.Palyginus jaunų sodinukų rezultatus su anksčiau gautais subrendusių Arabidopsis lapų rezultatais, buvo nustatyti penki baltymai, kurie šiuose audiniuose yra skirtingai fosforilinami, o tai rodo šio metodo potencialą tiriant baltymų fosforilinimo dinamiką augalų vystymosi metu.